(3) 用酸或無機(jī)鹽沉淀蛋白質(zhì)后取上清液,調(diào)節(jié)pH 值后萃?。?/div>
(4) 超聲15min后加入水、緩沖液,取上清液萃取。尿液樣品中的藥物濃度較高,加樣前先用水或緩沖液稀釋,必要時可用酸、堿水解反應(yīng)破壞藥物與蛋白質(zhì)的結(jié)合,然后萃取。流速應(yīng)控制為1ml/min,流速快不利于待測物與固定相結(jié)合。
4.淋洗 反相SPE的清洗溶劑多為水或緩沖液,可在清洗液中加入少量有機(jī)溶劑、無機(jī)鹽或調(diào)節(jié)pH值。加入小柱的清洗液應(yīng)不超過一個小柱的容積,而SPE濾膜為5～10ml。
5.洗脫待測物 應(yīng)選用5～10ml離子強(qiáng)度較弱但能洗下待測物的洗脫溶劑。若需較高靈敏度,則可先將洗脫液揮干后,再用流動相重組殘留物后進(jìn)樣。體內(nèi)樣品洗脫后多含有水,可選用冷凍干燥法。保留能力較弱的SPE 填料可用小體積、較弱的洗脫液洗下待測物,再用極性較強(qiáng)的HPLC 分析柱如C18柱分析洗脫物。若待測物可電離,可調(diào)節(jié)pH 值,抑制樣品離子化,以增強(qiáng)待測物在反相SPE 填料中的保留,洗脫時調(diào)節(jié)pH值使其離子化并用較弱的溶劑洗脫,收集洗脫液后再調(diào)節(jié)pH值使其在HPLC分析中達(dá)到*分離效果。在洗脫過程中應(yīng)減慢流速,用兩次小體積洗脫代替一次大體積洗脫, 回收率更高。
